Technologies du vivant - Life Technologies

Quantification par LC / MS / MS des formes conjuguées des métabolites de la nandrolone

Ho, Ngoc Huy ; Frey, Urban (Dir.)

Mémoire de diplôme HES : Haute Ecole d'Ingénierie, 2006.

Une méthode d’analyse par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en mode tandem (LC-MS/MS) des métabolites conjugués de la nandrolone : 19-norandrostérone glucuronide (NAG), 19-norétiocholanolone glucuronide (NEG), 19- norandrostérone sulfate (NAS) et 19-norétiocholanolone sulfate (NES) a été développée lors de ce travail de diplôme. Cette méthode simple... Plus

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    Résumé
    Une méthode d’analyse par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en mode tandem (LC-MS/MS) des métabolites conjugués de la nandrolone : 19-norandrostérone glucuronide (NAG), 19-norétiocholanolone glucuronide (NEG), 19- norandrostérone sulfate (NAS) et 19-norétiocholanolone sulfate (NES) a été développée lors de ce travail de diplôme. Cette méthode simple a permis une analyse et une quantification directes des composés sans devoir modifier leur structure chimique ainsi qu’une séparation des deux paires d’énantiomères NAG/NEG et NAS/NES. Cela permet de conserver des informations précieuses sur le métabolisme de la nandrolone. Ces informations permettraient l’identification de marqueurs plus spécifiques afin de discriminer, à basse concentration, une prise de nandrolone d’une production endogène du stéroïde. Ainsi, trois colonnes d’extraction sur phase solide MAX (Mixed-mode Anion-eXchange), HLB (Hydrophilic-Lipophilic Balance) et WAX (Mixed-mode Weak Anion-eXchange) ont été testées afin d’isoler les métabolites conjugués. Puis, une optimisation des méthodes d’extraction a été mise au point pour les colonnes HLB et WAX afin d’obtenir le meilleur rendement dans l’eau avant une application sur une matrice urinaire. Lors de l’extraction par les colonnes HLB de 20 ng/ml dans l’eau, des rendements compris entre 94.3% et 102.7% ont été obtenus avec des coefficients de variation compris entre 1.4% et 4.4%. Les rendements à l’aide de colonnes WAX varient entre 97.5% et 105.1% avec des coefficients de variation compris entre 2.3% et 8.3%. Les extractions effectuées sur des échantillons urinaires ont donné des rendements aléatoires et absurdes causés par l’important effet de matrice.
    Zusammenfassung
    Eine MS/MS gekoppelte LC-Analysemethode der konjugierten Nandrolonmetaboliten ( NAG, NEG, NAS, NES) wurde durch diese Diplomarbeit entwickelt. Diese einfache Methode erlaubte eine direkte Analyse und Quantifizierung der Molekülen, ohne ihre chemische Struktur modifizieren zu müssen, wie eine Trennung der zwei Enantiomerpaare NAG/NEG und NAS/NES. Das erlaubt, hochwertige Informationen über Nandrolonmetabolismus zu erhalten. Diese Informationen könnten auch erlauben, mehr spezifische Anzeiger zu identifizieren, um mit niedrigen Konzentrationen eine Nandrolonabsorption von einer endogenen Steroideproduktion zu diskriminieren. So wurden drei Extraktionkolonnen (MAX, HLB, WAX) getestet, um die konjugierte Metaboliten zu isolieren. Danach, eine Extraktionsmethodenoptimierung wurde für HLB und WAX Kolonnen zuarbeitet, um den besten Ertrag im Wasser zu erhalten, bevor diese Methoden auf eine Urinmatrize anzuwenden. Während einer HLB Kolonne 20ng/ml im Wasser Extraktion, 94.3% zu 102.7% Erträge mit 1.4% zu 4.4% Variationskoeffizienten wurden erhaltet. WAX Kolonnen Erträge schaukeln zwischen 97.5% und 105.1% mit Variationskoeffizienten zwischen 2.3% und 8.3%. Wegen eines wichtigen Matrizeeffekts, Extraktionen in Urinproben ergaben zufällige und unsinnige Erträge.