Technologies du vivant - Life Technologies

Cis-regulatory sequences driving the expression of ectodermin in paracentrotus lividus sea urchin embryo

Super, Alexandre ; Schmid, Sergio (Dir.)

Mémoire de diplôme HES : Haute Ecole d'Ingénierie, 2008.

Objectifs: L’Ectodermin est une ubiquitin ligase qui favorise la dégradation du facteur de transcription Smad4 (Dupont et al., 2005), régulant les processus de différentiation et de prolifération cellulaires. Un gène codant pour cette enzyme a été identifié dans l’espèce d’oursin Paracentrotus lividus. Des expériences préliminaires (RT-PCR et ISH) ont révélés qu’il était... Plus

Ajouter à la liste personnelle
    Résumé
    Objectifs: L’Ectodermin est une ubiquitin ligase qui favorise la dégradation du facteur de transcription Smad4 (Dupont et al., 2005), régulant les processus de différentiation et de prolifération cellulaires. Un gène codant pour cette enzyme a été identifié dans l’espèce d’oursin Paracentrotus lividus. Des expériences préliminaires (RT-PCR et ISH) ont révélés qu’il était probablement impliqué dans la spécification de l’ectoderme oral dans l’embryon. L’objectif de ce projet est de révéler la function et les caractéristiques d’expression de cette enzyme pendant l’embryogenèse. Pour cela, il est tout d’abord nécessaire d’analyser in-silico la séquence d’ADN pour trouver les sites de cis-régulation putatifs. Des transgènes promoteur-GFP doivent également être réalisés et injectés afin d’observer les motifs spatiaux et temporels d’expression. L’expression ectopique de l’Ectodermin, engendrée par l’injection d’ARNm synthétique, devrait permettre de formuler des hypothèses préliminaires quant à la fonction de cette enzyme dans les processus de l’embryogenèse. Résultats: L’analyse in-silico a permis de révéler plusieurs facteurs de régulation potentiels tels que Twist, TCF, GATA, Cdx, Nkx ou encore HNF. L’implication ou non de ces sites devra être déterminée par des expériences complémentaires. Trois transgènes (contenant des fragments de promoteur de 1.1, 1.45 et 2.5kb) ont été réalisés et injectés. Jusqu'à présent aucune expression de GFP n’a pu être mesurée dans les embryons injectés. Des investigations in-silico complémentaire ont révélés qu’une séquence de 2.5kb adjacente au terminateur du gène pourrait être impliquée dans la régulation de l’expression génétique. L’expression ectopique de l’Ectodermin a induit des altérations remarquables au niveau des structures du squelette de la larve pluteus.