Technologies du vivant - Life Technologies

Der Einsatz von Radialflusssäulen im Capture-Schritt von Antikörperaufreinigungen

Savoy, Isabelle ; Crelier, Simon (Dir.)

Mémoire de diplôme HES : Haute Ecole d'Ingénierie, 2008.

Objectif : Le but de ce travail consiste à déterminer l’enjeu d’une colonne de chromatographie radiale dans la purification d’anticorps au niveau de l’étape de capture. La stratégie de package d’une colonne radiale en « recycling mode » sera optimisée et comparée avec celle d’une colonne axiale prototype. La détermination des paramètres de capture permettra la réalisation... Plus

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    Résumé
    Objectif : Le but de ce travail consiste à déterminer l’enjeu d’une colonne de chromatographie radiale dans la purification d’anticorps au niveau de l’étape de capture. La stratégie de package d’une colonne radiale en « recycling mode » sera optimisée et comparée avec celle d’une colonne axiale prototype. La détermination des paramètres de capture permettra la réalisation d’essai sur les 2 colonnes déjà citées, afin de les comparer. Résultats : Une nouvelle méthode a été développée pour le package de la CRIO-MD 62 (colonne radiale). Celle-ci a permis d’augmenter l’efficacité qui s’élève ainsi à 1800 N/m ainsi que d’améliorer le coefficient d’asymétrie à 1.05. Les paramètres de package optimaux de la CRIO-MD 63 n’ont pas été trouvés. L’effet positif du conditionnement de la colonne sur la qualité du lit packé a été démontré. A l’aide d’essais avec inversion de flux, l’effet du système de distribution du liquide à l’entrée de la colonne a été mis en évidence. L’efficacité s’élève à 1500 N/m et tombe à environ 270 N/m du moment que l’effet du système de distribution est tenu en compte. Les élutions par gradient linéaire (LGE) d’un échantillon de EGFP sur du fractogel SO3 - ont permis, sur la base des courbes K-I, de développer une élution par étape, qui permis la séparation des composants du mélange. Ces essais n’ont pas permis de constater une différence entre la conformation radiale et axiale des colonnes utilisées, car l’échantillon n’était pas suffisamment pur. Les LGE d’un échantillon de lysozyme ont permis de mettre en évidence une différence entre les deux géométries des colonnes. Le traitement des résultats a été fait avec la même formule. Cette formule n’est cependant pas applicable à une géométrie radiale. De ce fait, une nouvelle expression reliant les valeurs GH à IR a été développée, mais ne peut pas être résolue analytiquement. Faute de temps, l’apport d’une colonne radiale dans la purification d’anticorps n’a pas pu être déterminé.
    Zusammenfassung
    Ziel : Ziel dieser Arbeit besteht aus den Untersuchungen zur Aufreinigung von Antikörper mittels Radial fluss chromatographie Säule. Die Packstrategie zur Packung einer Radial Fluss Säule im « recycling mode » wird optimiert. Die Parameter zum Capture von Antikörper werden bestimmt und Capture Versuche werden ermöglichen, ein axial Prototyp Säule mit einer radialen Säule zu vergleichen. Ergebnisse : Die optimierte Packstrategie im recycling mode der CRIO-MD 62 ermöglicht eine höhere Effizienz als bei der standard Methode, und zwar 1800 N/m und ein Asymmetriekoeffizient von ca. 1.05. Die optimalen Packparameter zum Packen der CRIO-MD 63 wurden nicht gefunden. Es wurde gezeigt, dass die Konditionierung die Qualität der Packung bzw. die Effizienz stark positiv beeinflusst. Der Einfluss des Verteilerssystems wurde mittels Flussumkehrversuche hervorgehoben. Dieses verschlechtert die Effizienz der Säule sehr stark. Von einer Effizienz von ca. 1500 N/m senkt die Effizienz auf ca. 270 N/m sobald der Effekt des Verteilerssystems berücksichtigt wird. Die lineare Gradienten Elution (LGE) einer EGFP Probe auf Fractogel SO3 - ermöglichte auf Basis der K-I Kurven eine Stufenelution durchzuführen und die Trennung der verschiedenen Komponenten der Probe zu erreichen. Aufgrund der Unreinheit der Probe war einen Vergleich zwischen radialer und axialer Säule nicht möglich. Die LGE von Lysozym konnte einen Unterschied zwischen radialer und axialer Säule sichtbar machen. Aus diesem Versuch wurde gemerkt, dass der GH-IR Zusammenhang einer axialen Säule nicht auf eine radiale Säule übertragbar war. Von daher wurde eine neue Expression entwickelt, um diesen Zusammenhang zu repräsentieren. Die Gleichung ist nicht analytisch lösbar.